2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)
2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長片段、超保真、快速擴(kuò)增的shou選產(chǎn)品。2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)
2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)
目錄號(hào):71814
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 71814-05 | 71814-0100 |
2× LongHiFi PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 2 年。
經(jīng)常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個(gè)月。
產(chǎn)品簡介
2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長度、擴(kuò)增速度、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長片段、超保真、快速擴(kuò)增的shou選產(chǎn)品。
PCR產(chǎn)物為平末端，不需要加A頭，可直接用Blunt平末端系列載體克隆。
本產(chǎn)品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。使用時(shí)，只需加入模板、引物，并補(bǔ)足水至Mix終濃度為1×即可。
本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測序等后續(xù)操作。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 高產(chǎn)：一般 PCR 產(chǎn)物量比傳統(tǒng)產(chǎn)量高 50%-100%！
2. 高效：延伸速度可以達(dá)到 3-4kb/min，是 pfu 的 6-8 倍！
3. 高成功率：對(duì)于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果！
4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍以上。
5. 擴(kuò)增長度長：以復(fù)雜基因組 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 10kb，以簡單基因組、質(zhì)粒和噬菌體 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 15kb。
2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用說明：
一、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終濃度 |
2× LongHiFi PCR Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
參考模板用量：（以 50 μl 反應(yīng)體系為例）
質(zhì)粒：0.1-10 ng；
細(xì)菌基因組：10-100 ng；
人類基因組：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：實(shí)際操作中，首先要計(jì)算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后加 LongHiFi PCR Mix，瞬離，上機(jī)。
二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 15-20 seconds /kb | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 質(zhì)粒和簡單基因組等簡單模板，可以采用 10-15 sec/kb；復(fù)雜模板 ( 如人類基因組 DNA )，可以采用 20-25 sec/kb。
2. 對(duì)于高 GC 含量的模板，預(yù)變性和變性溫度可以提高到 98℃。
3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象，一般提示延伸時(shí)間過長，梯度縮短延伸時(shí)間（建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時(shí)間）直到獲得滿意結(jié)果。
三、結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)
