FUJIFILM Wako質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
125-05061，質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶Lysyl Endopeptidase®產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品品牌：Wako產(chǎn)品名稱：質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶LysylEndopeptidase®產(chǎn)品貨號(hào)：125-05061FUJIFILM Wako質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
125-05061，質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysyl Endopeptidase®
125-05061，質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysyl Endopeptidase®產(chǎn)品簡介：
產(chǎn)品品牌：Wako
產(chǎn)品名稱：質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysylEndopeptidase®
產(chǎn)品貨號(hào)：125-05061
產(chǎn)品規(guī)格：20 ug×5
FUJIFILM Wako質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時(shí)常用的蛋白分解mei即賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei，該mei可以特異性切除賴氨suan基團(tuán)C末端的多肽，可用于蛋白測(cè)序分析和 Lys-X 化合物的mei合成。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei和胰mei，可更好地切斷賴氨suan基團(tuán)的多肽，增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個(gè)樣品的凝膠內(nèi)消化。
來源：細(xì)菌
外觀：凍干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 緩沖液，pH８）
活性：0.03～0.07 AU/vial
分子量：27,000（瓊脂糖過濾），30,000（SDS-PAGE）
溶解性：溶于水或緩沖液
穩(wěn)定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中，可在４℃穩(wěn)定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃時(shí)能穩(wěn)定保存，但溫度超過50℃時(shí)不穩(wěn)定。
最適pH值：9.0~9.5
等電點(diǎn)：6.9~7.0
底物特異性：
可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA
抑制劑：DFP、PMSF、TLCK
◆特點(diǎn)
● 高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析
● 提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
● 根據(jù)使用量特意制備小包裝，方便使用
◆應(yīng)用
分別采用胰蛋白mei（Tp）、賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei（Lys-C）和 Tp與Lys-C 聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)mei切的效果比較。
牛血清蛋白 BSA 的條帶（100 ng）通過 SDS-PAGE 獲得，然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進(jìn)行mei切，再用 MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。
這些蛋白mei的實(shí)驗(yàn)效果見下表。
表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結(jié)果對(duì)照
這些結(jié)果表明 Lys-C mei解的錯(cuò)誤裂解率*低。Tp mei解時(shí)加入 Lys-C 后，錯(cuò)誤裂解率有所降低，同時(shí)，可以鑒定出更多的多肽。
Tp | Lys-C | Lys-C+Tp | |
裂解位點(diǎn) | 精氨suan和賴氨suan的Ｃ端 | 賴氨suan的Ｃ端 | 精氨suan和賴氨suan的Ｃ端 |
錯(cuò)誤裂解率 (錯(cuò)誤裂解所占比例 ) | 多（８%） | 很少（０%） | 少（３%） |
鑒定出的多肽數(shù)量 | １７ | １９ | ２２ |
胰蛋白mei（Tp）（圖 ａ）和賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei（Lys-C）+Tp（ 圖 ｂ）mei切后的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)照?qǐng)D。
Lys-C+Tp mei切后，可以在 m/z=2000 時(shí)得到吸收峰，而單獨(dú)的 Tp mei切在 m/z=2000 時(shí)沒有吸收峰。該結(jié)果表明 Lys-C 可以提高測(cè)序覆蓋度。
( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 ）
賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei
賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei，最初由 Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該mei可以特異性剪切賴氨suan殘基Ｃ末端和Ｓ-氨乙基半胱氨suan殘基的肽鍵，用于蛋白測(cè)序和 Lys-X 化合物的mei催化合成。該mei穩(wěn)定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小時(shí)之后，仍然擁有完整的生物活性。
外觀 | 凍干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8） | 活性 | 見包裝 |
分子量 | 27,000（凝膠過濾）；30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或緩沖液 |
優(yōu)良pH | 9.0-9.5（酰胺mei的優(yōu)良活性 pH） | 等電點(diǎn) | 6.9-7.0 |
抑制劑 | DFP、PMSF、TLCK | 來源 | 細(xì)菌 |
穩(wěn)定性 | 溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中，可于４℃穩(wěn)定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中，可于30℃穩(wěn) 定保存，但是50℃及以上不穩(wěn)定。 | ||
單位定義 | 一單位酰胺mei（AU）指在30℃ pH 9.5 時(shí)每分鐘產(chǎn)生１ μmol 對(duì)硝基苯胺所需的mei量。 | ||
底物特異性 | 水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | ||
非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA | |||
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級(jí) |
Wako 125-05061 | Lysyl Endopeptidase®, MS Grade | 20 μg×5 | 質(zhì)譜級(jí) |
FUJIFILM Wako質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
